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    秘:如何选择一台称心的凝胶成像系统

    [2019/7/11]

    凝胶成像系统几乎是每个分子生物学实验室的必需品。几十年来,凝胶成像的设备已经从简单的紫外线和宝丽来相机

    发展到先进的数字化数据采集和分析系统。它的用途是从琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶上分离的DNA中获取信息。


    据Bio-Rad的全球产品经理RaymondMiller介绍,目前很难研究市场,并确定谁是凝胶成像系统的客户,因为这个系统的

    应用如此广泛。“这是一种无处不在的技术。如果你身处生命科学领域,你就需要用到凝胶成像系统。”


    在此,我们就介绍一些选购时的重要考虑因素,包括多功能、灵敏度、动态范围和易用程度。

    灵敏度和动态范围

    尽管一些DNA成像应用只需要粗略的测定或“有没有”的结果,但大多数的研究人员还是希望获得最佳的数据质量。在选


    购凝胶成像系统时,灵敏度和动态范围往往是两个重要的考虑因素。


    很多人认为,相机分辨率是评估系统灵敏度的最佳参数,但Uvitec公司的经理KarineVictory认为,“事实上,灵敏度是通


    过大的镜头光圈、出色的低噪声相机、电子噪声的进一步深度冷却以及样品与光圈的最近距离来实现的。”她提醒说,拼

    接(binning)的做法可能牺牲CCD相机的分辨率。它允许在图像捕获时收集更多的光,但通过降低像素总数来降低总的分辨率。


    灵敏度是UVP(德国耶拿旗下公司)开发凝胶成像系统时优先考虑的事情。GelDoc-ItTS3是一台独立的成像系统,适合DNA

    和蛋白凝胶。它带有500万像素的相机和广角f/1.2镜头,以提供高分辨率和快速图像捕获。这个系统还可以升级到-57oC的

    CCD冷却相机,用于化学发光成像。


    UVP的产品经理SarahChaudhury认为,最新一代的GelDoc-It系列成像系统的进步包括“更灵敏的相机和光学元件,

    以及一键式的图像捕获和分析自动化”。


    动态范围与灵敏度密切相关。动态范围宽,则意味着在同一幅图像中可检测到低水平和高水平的样品。对于某些应用而言

    ,动态范围是重要的考虑因素,例如监控刺激化合物的影响或抑制剂对表达的影响。


    LI-CORBiosesciences提供了动态范围超过6个对数的仪器。据LI-COR的产品营销经理JeffHarford介绍,这意味着图像不会饱和。

    这家公司的OdysseyFc成像仪是为EB、SYTO60或SYBR等染料染色的DNA凝胶而设计的,并配有一次性托盘,以减少污染。

    OdysseyCLx适用于SYTO60染料。


    Harford表示,在评估凝胶成像系统时,数据采集的一致性也需要认真考虑。“动态范围宽的技术有助于各块凝胶之间获得一致的数据。

    确保技术是面向未来的。出版社很关心数据的可靠性和重复性,因此你需要确保你的系统每天提供稳定的数据。

    系统是否能做什么来消除凝胶或印迹之间的差异,这是很重要的。”他说。


    多功能

    尽管一台简单、专用的凝胶成像系统似乎是一个不错的选择,但大多数客户感兴趣的是多功能的系统,这指的是所分析的凝胶类型、

    检测方法和应用范围。为此,许多制造商生产出多功能的仪器,如多重荧光检测、兼容比色样品,甚至有更多的应用,

    如Western分析或组织切片分析。


    GEHealthcare生命科学部就提供一系列激光扫描仪,有着灵活的应用。它的AmershamTyphoon5生物分子成像仪可以对荧光、

    放射性标记和比色样品进行成像、除了适用于DNA凝胶、蛋白凝胶和印迹,这个系统还可以成像和分析微孔板、培养皿、组织切片及其他许多样品类型。


    除了激光扫描仪,GE还提供了两款CCD相机系统–ImageQuantLAS500和更先进的AmershamImager600,可用于DNA凝胶成像。

    GEHealthcare的资深科学家ErikBjerneld认为,研究人员在选择成像仪时,应当考虑是否需要化学发光检测。

    “如果用户主要对化学发光感兴趣,那么我们建议用CCD成像系统。如果荧光成像的灵敏度和分辨率更加重要,则建议使用激光扫描仪,”他说。


    安全性和易用性

    目前市场上有一个趋势,就是凝胶成像的自动化。这意味着,你只要将凝胶放入系统中,按下按钮就能完成分析。大多数系统提供一定程度的自动化。

    例如,UVP的GelDoc-ItTS3配备了广泛的自动化功能。VisionWorks软件可以利用预设的拍摄参数,

    如自动曝光、对焦、缩放等实现一键式的图像采集。


    用户考虑的另一个因素是安全性,这主要涉及到EB的使用。大家都知道,EB是诱变剂,需要特殊处理。

    平时,人们都会使用手套、防护设备,并防止仪器被EB污染。

    如今,许多更安全的染料可用于DNA凝胶,而仪器制造商也对成像系统进行了相应的优化,以支持这些更安全的选择。


    易用性也是Bio-Rad产品的一大特点。它的产品包括入门级GelDocEZ系统、功能更全的GelDocXR+系统,

    以及适用于工业规模凝胶成像的GS-900校准密度计。“我们投入了大量精力让这些系统更加易用,”Miller说。

    这包括大部分凝胶成像工作的自动化,比如缩放和对焦。


    如今,DNA凝胶成像系统的市场十分成熟,也充满竞争,在每个价格点都有多个选择。总的来说,

    个体需求和具体应用始终是首要的考虑因素,比如仪器在特定染料上的表现及检测方法的切换能力。

    人们也许很难找到仪器在特定应用中的一对一比较数据,因此需要密切留意产品资料,并与销售代表沟通。

    当然,这个系统应当是面向未来的,考虑到现在及将来的需求。



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